準備 シロツメクサなどの葉（緑葉であればよい）、TLCアルミシート（100×10mmに切っておく）、ねじ口
試験管、試験管立て、ゴム栓、乳鉢、乳棒、ピンセット、鉛筆、定規、サンプリングチューブ、駒込ピ
ペット、毛細管（ガラス管の一方を溶かして細く引き伸ばしたもの）、メスシリンダー、透明なシール、
定規、サインペン、ピンセット、薬包紙、粉末シリカゲル、ジエチルエーテル、石油エーテル、アセトン
方法
１ 実習の３〜４時間前に、石油エーテル：アセトン＝７：３の割合で混ぜて（展開液）、
試験管の底から10mmくらいの深さに入れておき、しっかり密閉しておく。 展開液はす
ぐに蒸発して組成が変化し てしまうので、使う直前に必要な分だけ作る。
２ TLCシートの下端より20mmのところに鉛筆で薄く横に線を引いておく（右図）。
３ シロツメクサの葉0.6ｇを粉末シリカゲル1.5ｇとともに乳鉢に入れ、乳棒で葉の形
が無くなるまですりつぶす。
（片山舒康 光合成色素の抽出と分離実験 理科の教育 pp.42-43 2001）
※ 粉末シリカゲルは粒状のシリカゲルをすりつぶして作るとよい。すりつぶすとき
には、ビニル袋の中などに入れて行い、粉をできるだけ吸い込まないように気をつ
ける。
４ 方法３でできた粉末0.4ｇをサンプリングチューブにいれ、ジエチルエーテル１ml
を加えてふたをし、10回ほど強く振る。
※ ジエチルエーテルは有害なので、できるだけ吸い込まないこと。
５ 方法４のサンプリングチューブの中の上部に緑色の層（抽出液）が分離したら、毛細管の先端を軽く浸すと抽出液がガラス管に入ってくるので、毛細管をTLCシートに
引いた線の中央（原点）に押しつけ、TLCシートに抽出液をしみ込ませる。この操作
を５回繰り返す。
６ TLCシートを方法１で用意した試験管の中にゆっくり入れ、しっかりふたをして色
素を分離する。
※ できるだけ展開液の液面を波立たせないこと。
７ 約15〜20分で展開液がTLCシートの上端まで
しみ上がるので、すぐに取り出し展開液がしみ
あがったところに鉛筆で線を引き、透明なシー
ルを上から貼って（色あせを少し防げる）、各
色素の最も濃くなっている部分にサインペンな
どで印をつける。
８ 原点から各色素の中央までの長さを測り、展
開液がしみ上がった長さで割って、各色素のRf
値を求める。
結果 種子植物では一般に右図のような色素が分離できる。各色素の色調とこの図に 分離結果 →
示されている順番をもとにして色素名を調べるとよい。クロマトグラフィーでは、
Rf値は展開条件（容器・展開液の組成・温度など）によって変わるので、高校の
実験では、あくまで参考程度にとどめる方がよい。
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